NY_T 2291-2012 玉米细菌性枯萎病监测技术规范
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ID： |
2F42404B456649A7A436267C00649B22 |
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0.64 |
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11 |
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日期： |
2024-8-13 |
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ICS 65.020 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 2291—2012,玉米细菌性枯萎病监测技术规范,Guidelines for quarantine surveillance of,Pantoea stewartii subsp. stewartii (Smith) Mergaert et al.,2012-12-24 发布 2013-03-01 实施,中华人民共和国农业部发布,ny/t 2291—2012,前 言,本标准按照GB/T 1. 1给出的规则起草,本标准由农业部种植业管理司提出,本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC 271)归ロ,本标准起草单位:全国农业技术推广服务中心、江苏省植物保护站、南京农业大学,本标准主要起草人:冯晓东、龚伟荣、胡白石、熊红利、胡婕、褚姝频、李潇楠、朱莉,I,NY/T 2291—2012,玉米细菌性枯萎病监测技术规范,1范围,本标准规定了农业植物检疫中玉米细菌性枯萎病的疫情监测、室内检验、监测记录和报告的方法,本标准适用于玉米细菌性枯萎病菌的疫情监测,2规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文,件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件,GB 15569农业植物调运检疫规程,GB/T 23624玉米种子产地检疫规程,SN/T 1375玉米细菌性枯萎病菌检疫鉴定方法,3原理,玉米细菌性枯萎病菌 Pantoea stewartii subsp. stewartii（Smith）Mergaert et al.是危害玉米引,起枯萎病的ー种病原细菌,病害可造成严重产量损失,为进境植物检疫性有害生物。属原核生物界,（Procaryotae）,薄壁菌门（Gracilicutes ）,肠杆菌科（enterobacteriaceae ）,泛菌属（Pantoea ） 〇 异名:,Erzvinia stewartii （Smith）Dyeo,玉米细菌性枯萎病菌的田间症状、生理生化反应、血清学反应和PCR反应等特征是其检测与鉴定,的重要依据,4试剂与材料,氢氧化钾（KOH）、氯化钠（NaCl）、碘化钾（KI）、碘（レ）、草酸镀［（NHdCOノ、甲基红指示剂、,aー秦酚、乙醇、结晶紫、蔗糖、明胶、琼脂、牛肉浸膏、蛋白陈、酵母提取物等。检验中所需的其他试剂与培,养基,参见附录A,所有试剂均为分析纯,5仪器与用具,超净工作台、电子天平、显微镜、培养箱、摇床、高压灭菌锅、载玻片、盖玻片、解剖刀、注射器、培养,皿、试管和接种针等,6疫情监测,6.1 监测区域,重点监测玉米制繁种基地、引进境外玉米种子种植区、进口玉米加工和销售场所及其周边的玉米田,等高风险区域,6.2 监测时间,玉米整个生长期,重点监测苗期至吐丝期,6.3 监测方法,6.3.1 踏查,1,NY/T 2291—2012,在玉米不同生长期,选择有代表性的田块进行踏查,观察田间玉米有无细菌性枯萎病发病症状（参,见附录B）,必要时可采用定点（定株）系统调查。同时调查种子来源、栽培管理及病虫害发生情况,做好,记录。发现有典型或疑似症状的植株,采样进行室内检验,6. 3.2系统监测,选择有代表性的田块,进行田间定点定期调查,每30 d调查一次,采取5点取样或随机取样方法,每点选取植物!0株.20株进行调查,也可根据需要增减调查数量。疑似症状植株采样进行室内检验,6. 3.3产地检疫,玉米制繁种基地的疫情调查,按照GB/T 23624的要求进行田间调查,6. 3.4调运检疫,按照GB 15569的要求对调出的玉米种子进行调运检疫;对调入本地的玉米种子进行复检;并取样,进行室内检验,7室内检验,7. I鉴定方法,7. 1. I常规鉴定,7. 1. 1. 1喷菌检查,切取田间采回的植株叶片病健交界处约!0mm2.20 mm2,平放在载玻片的水滴中,加盖玻片后,在,低倍显微镜下检查,观察有无喷菌现象,7. 1. 1.2分离培养鉴定,选择田间采回的具有新鲜症状的植株叶片进行病菌分离。在无菌条件下取病健交界处组织约5,mmX5 mm,用75%乙醇表面消毒15 s,无菌水清洗2次.3次后放入0. 2 mL无菌水中,用灭菌玻璃棒,研碎,在室温下浸泡30 min。将浸出液在NA培养基平板上划线,重复3个.5个平板,（27士2）°C培养,3 d.5 d。观察病原菌形态特征和培养特性,玉米细菌性枯萎病菌形态特征参见附录C,7.1. 1.3革兰氏染色,挑取少量分离到的病原菌悬浮液,涂片固定后用草酸镀结晶紫染1 min,自来水冲洗。加碘液覆盖,涂面染1 min后水洗,并用吸水纸吸去水分。加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,30 s后水洗,吸去,水分。加番红花红液染10 s后,自来水冲洗。干燥,镜检。若菌体都呈紫色为革兰氏阳性菌,菌体呈红,色为革兰氏阴性菌,也可在载玻片上加一小滴3%KOH液。用灭菌牙签挑取少量纯培养的菌落,放入3%KOH液滴,中,轻轻搅拌。5 s.10 s后慢慢向上提起,如有黏丝出现,则为革兰氏阴性菌;若无黏丝出现,即为革兰,氏阳性菌,7.1. 1.4致病性鉴定,将待测菌配成每毫升含有108个细胞的菌悬液,用注射器注射接种于3叶期.4叶期盆栽的玉米幼,苗茎基部,直到喇叭口处出现菌液为止。接种植株用塑料袋保湿24 h, 12 h光照/黑暗的循环条件下,3。℃培养。接种? d后观察植株发病症状,7. 1. 1.5生理生化测定,玉米细菌性枯萎病菌的生理生化测定方法参见SN/T 1375,7. 1. 2 SPA-EL……
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